bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays

使用核苷酸的直接檢測和均一的熒光讀數(shù)對酶進(jìn)行通用的高通量篩選測定。

TRANSCREENER ADP 2分析

激酶測定

ATP酶測定

TRANSCREENER AMP 2 / GMP 2分析

磷酸二酯酶測定

連接酶和合成酶檢測

糖基轉(zhuǎn)移酶測定

甲基轉(zhuǎn)移酶測定

交易者GDP檢測

GTPase檢測

GAP檢測

GEF分析

糖基轉(zhuǎn)移酶測定

TRANSCREENER UDP 2分析

糖基轉(zhuǎn)移酶測定

傳送者 CGAMP檢測

cGAS分析

TRANSCREENER ADO CD73分析

CD73檢測

成千上萬個(gè)目標(biāo)的分析。

• Transcreener檢測依賴于核苷酸的直接免疫檢測，與復(fù)雜的酶聯(lián)檢測方案相比，它不易受到干擾的影響。
• 四種類型的Transcreener核苷酸檢測測定法使您可以更快，更高效地篩查數(shù)千種目標(biāo)酶。
• 您可以選擇FP，F(xiàn)I和TR-FRET讀數(shù)；所有產(chǎn)品均帶有深紅色熒光，并在主要的多模式閱讀器上具有經(jīng)過認(rèn)證的性能。
• 均質(zhì)，混合和讀取格式可用于終點(diǎn)分析或連續(xù)監(jiān)測酶活性。
• 過夜的試劑和信號穩(wěn)定性意味著可以在大型自動(dòng)化屏幕中獲得可靠，可靠的篩選數(shù)據(jù)。

Transcreener：工作原理

Transcreener是一種通用的測定方法，可用于整個(gè)核苷酸依賴性酶家族。無需對大量特定的反應(yīng)產(chǎn)物（例如磷酸化的蛋白質(zhì)或脂質(zhì)）使用單獨(dú)的測定法，而是可以將單核苷酸檢測測定法用于產(chǎn)生共同核苷酸產(chǎn)物的所有酶。例如，ADP檢測可用作任何蛋白質(zhì)，脂質(zhì)或碳水化合物激酶的通用激酶測定方法。

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Transcreener分析法依靠使用能夠基于單個(gè)磷酸基團(tuán)區(qū)分核苷酸的抗體直接，高度特異性地檢測核苷酸。產(chǎn)物核苷酸相對于底物的選擇性（例如，激酶測定的ADP相對于ATP的選擇性）為150倍至1000倍以上。這種*的選擇性允許在底物核苷酸過量的情況下檢測核苷酸酶產(chǎn)物（例如，在激酶測定中存在過量ATP的情況下進(jìn)行ADP檢測），這是測量酶初始速度的必要條件。

為了產(chǎn)生信號，Transcreener分析使用均質(zhì)的競爭性免疫分析形式，其中抗體與高親和力熒光示蹤劑配對。示蹤劑被檢測到的核苷酸置換會(huì)導(dǎo)致其熒光性質(zhì)發(fā)生變化。FP分析是簡單的方法。它只需要示蹤劑和未修飾的抗體；極化的變化是由示蹤劑移動(dòng)時(shí)增加的旋轉(zhuǎn)遷移率引起的。對于TR-FRET和FI格式，抗體與分子結(jié)合，該分子在結(jié)合時(shí)會(huì)改變示蹤熒光的強(qiáng)度，而在置換示蹤劑時(shí)會(huì)失去這種效果。

Transcreener：為什么直接檢測對HTS更好

與任何其他核苷酸檢測分析法相比，轉(zhuǎn)導(dǎo)分子測定法試劑更少，機(jī)制也更簡單，后者通常需要偶聯(lián)酶才能將核苷酸轉(zhuǎn)化為可以通過報(bào)告酶產(chǎn)生信號的產(chǎn)物。每種偶聯(lián)和報(bào)告酶都是被篩選化合物的潛在靶標(biāo)，這會(huì)增加假陽性或缺失命中的風(fēng)險(xiǎn)，并需要額外的孔來進(jìn)行反篩選。（某些ADP檢測方法甚至使用激酶作為偶聯(lián)酶，這進(jìn)一步使它們在激酶抑制劑篩選中的使用變得復(fù)雜。）

直接檢測還意味著該方案是簡單，靈活的方案：運(yùn)行您的酶反應(yīng)，在停止混合的情況下添加Transcreener試劑，并讀取板。或者可以在酶反應(yīng)開始時(shí)添加Transcreener檢測試劑，以連續(xù)監(jiān)測酶活性。例如，通過“跳躍稀釋”激酶測定法測量抑制劑的停留時(shí)間。一些耦合方法需要額外的液體添加和溫育步驟，這會(huì)使化驗(yàn)自動(dòng)化變得復(fù)雜，并使其無法以連續(xù)模式運(yùn)行。

用生化分析方法測量藥物靶標(biāo)停留時(shí)間的指南

出色的試劑穩(wěn)定性-簡化篩選

所有Transcreener抗體和示蹤劑以及測定信號在室溫下至少穩(wěn)定8小時(shí)。這樣可確保即使在大型的自動(dòng)屏幕中，數(shù)據(jù)質(zhì)量也不會(huì)受到影響，因?yàn)樵谶@種情況下，檢測混合物可能會(huì)在室溫下長時(shí)間存放在分配臺中。由于偶聯(lián)酶的不穩(wěn)定性，其他核苷酸檢測測定法具有更嚴(yán)格的解凍后儲(chǔ)存要求。此外，與某些耦合酶測定法產(chǎn)生的瞬態(tài)信號不同，Transcreener熒光信號至少會(huì)持續(xù)一整夜-持續(xù)數(shù)天-因此，在添加檢測試劑后很長時(shí)間即可讀取板。出色的試劑和信號穩(wěn)定性使Transcreener分析非常可靠，易于在自動(dòng)化HTS環(huán)境中使用。

Transcreener：您可以用它做什么

成千上萬的細(xì)胞反應(yīng)使用核苷酸，包括大多數(shù)催化蛋白質(zhì)翻譯后修飾（例如磷酸化和甲基化）的酶。由于它們在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的核心作用，許多PTM酶已成為藥物靶標(biāo)。盡管蛋白激酶受到廣泛的關(guān)注，但是乙酰基轉(zhuǎn)移酶，甲基轉(zhuǎn)移酶和糖基轉(zhuǎn)移酶也是經(jīng)過臨床驗(yàn)證的靶標(biāo)，并且還有更多與PTM相關(guān)的藥物正在研發(fā)中。開發(fā)了Transcreener檢測試劑盒，以使HTS能夠靶向PTM酶以及其他類型的核苷酸依賴性酶，包括ATPase，GTPases和磷酸二酯酶。

Transcreener Assays已開發(fā)并不斷改進(jìn)，可用于工業(yè)HTS環(huán)境。自2006年推出以來，它們已在使用的所有主要多模式讀板器中，在96，384或1536孔板上的超過6,000萬孔抑制劑篩選，分析和機(jī)理研究中使用。在激酶測定中使用ADP檢測占了這些孔的一半以上，這些用戶中的大多數(shù)在將Transcreener與其他測定方法進(jìn)行比較后決定使用Transcreener。對于許多非典型目標(biāo)-糖基轉(zhuǎn)移酶，解旋酶，羧化酶，GTP酶，連接酶，僅舉幾例-沒有很好的選擇，并且Transcreener確實(shí)是一項(xiàng)真正的使能技術(shù)。沒有它，屏幕可能不會(huì)前進(jìn)。

無論目標(biāo)是什么，在底物轉(zhuǎn)化率的整個(gè)范圍內(nèi)，底物轉(zhuǎn)化率均小于10％（通常低得多）時(shí)，所有Transcreener分析均會(huì)產(chǎn)生大于0.7的Z'值。它們在很大程度上不受酶測定中使用的大多數(shù)試劑的影響，并且信號至少在一夜之間是堅(jiān)如磐石的。我們已經(jīng)與主要的多模式儀器供應(yīng)商合作，包括Tecan，BMG，Biotek和Molecular Devices，以優(yōu)化儀器的硬件和軟件設(shè)置，以利用每種Transcreener Assays實(shí)現(xiàn)佳性能。每種Transcreener分析的技術(shù)手冊中都總結(jié)了佳的過濾器設(shè)置和儀器設(shè)置，更多的詳細(xì)信息請參見應(yīng)用手冊。這樣可以確保無論您喜歡哪種熒光檢測模式或閱讀器，