encapsula IMD-1011說明書

Immunodox®-Folate (PEGylated)

SKU# IMD-1011

描述

葉酸Immunodox®（聚乙二醇化）

脂質組成	濃度（mg / ml）	濃度（mM）	摩爾比百分比
氫化大豆PC	9.58	12.22	57
膽固醇	3.19	8.25	38
DSPE-聚乙二醇（2000）	2.7	0.96	4.5
DSPE-PEG（2000）-葉酸鹽	0.39	0.12	0.5
全部的	15.86毫克/毫升	21.55毫米	100

結合方案

材料和設備

為了將用FBP標記的抗體或蛋白質與Immunodox®-葉酸脂質體偶聯，您需要：

1. 建議使用實驗室渦旋混合器。
2. 透析需要實驗室磁力攪拌器。
3.  具有適當MWCO的Float-A-Lyzer®可以輕松清除游離和非結合蛋白/肽/配體的脂質體結合配體。您需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時，透析膜上的孔徑接近100 nm，因此可以透析您的脂質體。您不能盲目使用透析盒。在使用離心柱或透析盒之前，請先了解該技術。如果未使用正確的MWCO，則可能會失去全部準備。對于此協議，我們建議MWCO為300,000道爾頓。

制備方法

1. 葉酸中的總脂質濃度為21.55 mM。脂質體中0.5％mol的脂質包含PEG-葉酸酯基團，并且只有一半暴露于脂質體的外部，這等于0.053 mM的反應性結合脂質。對于2ml體積的脂質體，其等于1.08×10 ^-7 mol，對于5ml體積的脂質體，其等于2.69×10 ^-7 mol的PEG-葉酸酯。 將FBP標記的抗體與PEG-葉酸酯脂質的摩爾比添加為1:20。
2. 在室溫下將Immunodox®-Folate與抗體-FBP一起孵育1小時。
3. 透析除去非結合的抗體，蛋白質，肽或配體。與尺寸排阻色譜柱相比，我們更喜歡透析。透析的過程要慢得多，但是從非結合蛋白/多肽/配體中清除了制備物后，免疫脂質體的損失將降低。旋轉柱要快得多，但您很容易損失掉旋轉柱上50％以上的脂質體。我們建議使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根據蛋白質，配體，抗體或抗體片段的分子量選擇合適的MWCO盒。 筆記：如果決定使用透析盒，則需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時，透析膜上的孔徑接近100 nm，因此可以透析您的脂質體。您不能盲目使用透析盒和離心柱。它們有各種尺寸，您需要明智地選擇正確的尺寸。在1升pH 7.4的PBS中透析免疫脂質體溶液8小時。用新鮮的1升PBS更換透析緩沖液，再透析8小時。完成此步驟后，即可使用旋轉柱或透析盒來使用已清理的免疫脂質體。如果未使用正確的MWCO，則可能會失去全部準備。

脂質體顆粒計算器

Immunodox®脂質體是單層的，尺寸為100 nm。脂質體的摩爾濃度為21.55mM。通過具有 脂質體直徑（nm）和脂質濃度（µM），您可以計算出一個脂質體中脂質的總數和一毫升脂質體溶液中脂質體的數目。要使用計算器，請單擊 此處。

技術說明

• 阿霉素是具有_λex 470 nm和_λem 585 nm的熒光分子。如果您在抗體或配體上使用熒光標簽，則需要確保它們不會互相干擾。
• 請記住，表面含有葉酸的脂質體的主要用途是靶向細胞上的葉酸受體。使用標記有FBP的抗體/蛋白質或配體制備免疫脂質體是非常利基的應用。
• 由于暴露于低pH下葉酸和FBP之間的親和力降低，免疫脂質體在暴露于內體小室的低pH環(huán)境后通過內吞作用而被內在化后可能會解體。通過允許將內化的脂質體分選到適當的亞細胞區(qū)室和/或促進藥物分子從脂質體的細胞內釋放，這種內化觸發(fā)的解偶聯可能有益于在細胞水平上遞送脂質體藥物。
• 可以使用尺寸排阻旋轉柱（例如Sepharose®CL-4B）代替Float-A-Lyzer®透析盒。但是，在純化過程中，大量的脂質體會粘在色譜柱上，因此我們強烈建議使用透析法，而不是使用大小排他的珠子。
• 如果您使用的是疏水的配體或肽，則建議將其溶解在DMSO或DMF中，然后向其中添加緩沖液。建議溶液中使用的DMSO或DMF量不超過5％。DMF和DMSO均與脂質體相容，并且也可與水混溶。其他有機溶劑（例如乙醇和氯方）與脂質體不相容，會導致脂質體裂解。如果終使用DMSO或DMF，那么在完成偶聯反應后，您需要從脂質體中除去DMSO和DMF。為此，您需要使用由再生纖維素膜制成的透析盒。注意：并非所有膜都與DMF和DMSO兼容。我們建議使用Slide-A-Lyzer™MINI透析設備 由ThermoFisher生產的再生纖維素膜制成的MWCO為2K。去除DMSO或DMF后，您可以使用Float-A-Lyzer®透析設備進行清理準備的后一步。
• 脂質體應保持在4°C且切勿冷凍。